Chlorogenic acid inhibits glioblastoma growth through repolarizating macrophage from M2 to M1 phenotype
这篇论文研究了绿原酸（Chlorogenic acid, CHA）通过将巨噬细胞从M2表型极化转变为M1表型来抑制胶质母细胞瘤生长的机制。
CHA 对白细胞介素 (IL)-4 诱导的巨噬细胞标志物表达的影响
研究背景
1、胶质母细胞瘤（GBM）是一种极具侵袭性的脑肿瘤，预后极差，患者生存期通常不超过15个月，即使经过手术切除和常规的化疗、放疗，效果也不理想。
2、GBM的免疫微环境在其进展和转移中起着关键作用，特别是小胶质细胞/巨噬细胞的浸润。如何通过调节巨噬细胞的极化状态来抑制肿瘤生长是一个重要的研究难点。
3、现有研究表明，绿原酸（CHA）在多种恶性肿瘤中具有抗肿瘤效应，但其具体机制尚不明确，特别是在调节巨噬细胞极化方面的作用。
研究方法
1、体外实验：使用LPS/IFNγ和IL-4分别诱导M1和M2巨噬细胞极化，检测CHA对其极化状态的影响。通过RT-PCR分析M1和M2标记基因的表达变化，使用流式细胞术检测细胞表面标志物的表达。
2、体内实验：在G422胶质瘤异种移植小鼠模型中，评估CHA对肿瘤生长的抑制作用，并通过流式细胞术和免疫荧光染色分析肿瘤组织中M1和M2巨噬细胞的分布。
实验设计
1、在体外实验中，CHA处理显著增加了LPS/IFNγ诱导的M1标记基因（如iNOS、MHC II和CD11c）的表达，并减少了IL-4诱导的M2标记基因（如Arg1和CD206）的表达。具体来说，CHA在1 μM浓度下显著增加了Ana-1细胞中iNOS mRNA水平，并减少了Arg1 mRNA水平（P ≤ 0.05）。
2、在体内实验中，CHA处理的小鼠肿瘤重量显著减少，肿瘤抑制率在20 mg/kg和40 mg/kg剂量组分别为30%和48%（P ≤ 0.05）。CHA处理的小鼠肿瘤组织中CD11c+ M1巨噬细胞比例增加，而CD206+ M2巨噬细胞比例减少。
结果与分析
1、CHA通过促进STAT1信号通路激活和抑制STAT6信号通路激活来调节巨噬细胞的极化状态。具体来说，CHA显著增加了p(Tyr701)-STAT1和p(Ser727)-STAT1的表达，并减少了p(Tyr641)-STAT6的表达（P ≤ 0.05）。
2、在共培养实验中，CHA显著抑制了M2巨噬细胞对肿瘤细胞的促增殖作用，并增强了M1巨噬细胞的抗肿瘤效应。CHA处理后，U87胶质瘤细胞的形态变为凋亡样圆形。
总体结论
1、CHA通过抑制M2极化和促进M1极化，调节巨噬细胞的极化状态，从而抑制胶质母细胞瘤的生长。具体机制包括促进STAT1信号通路激活和抑制STAT6信号通路激活。
2、这篇论文首次展示了CHA通过调节巨噬细胞极化来抑制胶质母细胞瘤的生长，提供了新的治疗思路和方法。