这篇论文研究了绿原酸（CHA）作为潜在的癌症免疫治疗剂，特别是通过制备含有CHA-磷脂复合物（PC）的聚乙二醇化脂质体（CHA-PC PEG-Lipo，简称CPPL）来降低给药频率。

CHA-PC脂质体的制备和给药方案

研究背景

1、癌症是全球主要致死疾病之一，传统化疗效果有限且副作用显著，尤其在肿瘤转移和复发时效果不佳。

2、免疫治疗虽然显示出潜力，但药物耐药性削弱了其效果。此外，天然药物如绿原酸（CHA）虽然具有多种药理效应，但其体内不稳定性和低口服生物利用度限制了临床应用。

3、现有研究表明，CHA具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗肿瘤和免疫调节等多种生物活性，但其低口服生物利用度和短半衰期需要频繁注射，导致患者依从性差。

研究方法

1、制备了CHA-PC，并将其包封在脂质体和PEG化脂质体中，分别命名为CPL和CPPL。

2、通过动态光散射（DLS）和透射电子显微镜（TEM）对CPL和CPPL的形态、粒径、多分散指数（PDI）、zeta电位和包封效率进行了表征。

4、在4°C下评估了CPL和CPPL的储存稳定性，并在模拟体内环境的培养基中评估了其体外稳定性。

5、通过高效液相色谱（HPLC）和液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）分析了CPL和CPPL在大鼠体内的药代动力学和体内分布。

6、使用G422小鼠胶质瘤细胞异种移植模型评估了CPL和CPPL的抗肿瘤效果，并通过流式细胞术和免疫组化分析了其对免疫细胞的影响。

实验设计

1、CPL和CPPL的粒径分别为220.37±0.75 nm和149.73±0.50 nm，包封效率均约为60%。

2、在4°C下储存30天后，CPL和CPPL的粒径、PDI、zeta电位和包封效率均无明显变化，表明其具有良好的储存稳定性。

3、在模拟体内环境的培养基中，CPPL的稳定性优于CPL，表明其在体内环境中更稳定。

4、药代动力学研究表明，CPPL显著延长了CHA在体内的循环时间，并增加了其在肿瘤中的积累。

5、在抗肿瘤效果评估中，CPPL在延长给药间隔至4天的情况下仍能保持与每日给药相同的抗肿瘤效果，而CHA溶液和CPL在延长给药间隔后抗肿瘤效果显著下降。

结果与分析

1、CPPL通过刺激CD4+和CD8+ T细胞浸润、抑制髓源性抑制细胞（MDSCs）表达、减少2、Th2相关因子的表达以及增加肿瘤组织中的记忆T细胞，表现出优异的抗肿瘤免疫效果。

3、CPPL显著增加了肿瘤组织中的记忆T细胞（TEM和TCM），并提高了其在淋巴结中的比例，促进了长期免疫记忆的形成。

4、CPPL在延长给药间隔至4天的情况下仍能保持与每日给药相同的抗肿瘤效果，而CHA溶液和CPL在延长给药间隔后抗肿瘤效果显著下降。

总体结论

1、通过使用PEG化脂质体包封CHA，显著提高了CHA的体内稳定性和抗肿瘤免疫效果。

2、CPPL在延长给药间隔的情况下仍能保持优异的抗肿瘤效果，表明其在癌症治疗中具有重要的临床应用潜力。

这篇论文展示了CHA-PC PEG-Lipo在癌症免疫治疗中的潜力，特别是在延长给药间隔方面的优势。

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