这篇论文介绍了一种用于定量分析人血浆中绿原酸（Chlorogenic acid）的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法，并将其应用于中国晚期实体肿瘤患者的药代动力学研究。

研究背景

1、绿原酸是一种由咖啡酸和奎宁酸形成的脱羧酸，常见于咖啡、绿茶和一些中药中。绿原酸具有抗炎、抗氧化和清除自由基的作用，并显示出有效的抗癌活性。然而，目前缺乏一种简单、快速且可靠的定量分析方法来研究绿原酸在人体内的药代动力学。

2、现有的LC-MS/MS方法存在一些缺点，如需要大量血浆样本、复杂的提取系统和较长的分析时间，这些都限制了绿原酸在临床应用中的研究。

3、之前的研究主要集中在同时测定绿原酸与其他化合物，但这些方法在血浆样本需求量、提取复杂性和分析时间上存在不足。

研究方法

1、开发了一种简单、快速且特异的LC-MS/MS方法，用于定量分析人血浆中的绿原酸。使用新绿原酸作为内标，血浆样本用甲醇沉淀处理。

2、色谱分离在Zorbax C18柱上进行，流动相为含0.1%甲酸的甲醇-水梯度洗脱，流速为0.4 mL/min。

3、质谱检测在负离子模式下进行，采用多重反应监测（MRM）模式，绿原酸和内标的MRM转换均为m/z 353.2 → 191.2。

4、方法在10-2000 ng/mL浓度范围内进行了全面验证，日内和日间精密度（RSD%）均在10.7%以内，准确度（RE%）在-3.0%到10.6%之间。

实验设计

1、标准溶液和工作溶液的制备：绿原酸标准溶液和工作溶液在不同浓度下制备，并存储在-30°C。

2、样本处理：血浆样本与内标和甲醇混合后，经过涡旋和离心处理，最终上机分析。

3、方法验证：包括选择性、校准曲线性能、准确度、精密度、稀释完整性、灵敏度、携带效应、稳定性、回收率和基质效应等方面的验证。

结果与讨论

1、提取方法优化：选择甲醇作为沉淀剂，因其能提供更干净的色谱图，并在样本制备过程中加入0.1%甲酸以提高绿原酸的稳定性。

2、内标选择：新绿原酸被选为内标，因其结构与绿原酸相似，且在MRM通道中没有显著干扰。

3、LC-MS/MS方法优化：负离子模式提供了更强的信号强度，最终选择了甲醇-水（0.1%甲酸）系统作为流动相。

4、方法验证结果：日内和日间精密度和准确度均在可接受范围内，稀释完整性和灵敏度也符合要求。携带效应和基质效应在可接受范围内，稳定性测试结果表明绿原酸在不同条件下具有良好的稳定性。

临床应用

1、该方法成功应用于中国晚期实体肿瘤患者注射用绿原酸（CAFI）后的药代动力学研究。

2、11名受试者接受了不同剂量的CAFI注射，血液样本在不同时间点采集并分析。

3、结果显示，绿原酸在体内中度吸收，平均达峰时间为1小时，快速消除，半衰期为1小时。多次给药后没有明显积累，显示出良好的安全性。

总体结论

开发了一种简单、特异、快速的LC-MS/MS方法，用于定量分析人血浆中的绿原酸。该方法已成功应用于中国晚期实体肿瘤患者的药代动力学研究，提供了重要的药代动力学参数，为进一步研究CAFI在肿瘤患者中的应用提供了指导。

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