这篇论文研究了绿原酸（Chlorogenic acid）对食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）的抑制作用，发现绿原酸可以通过下调BMI1和SOX2的表达来抑制ESCC的生长、迁移和侵袭。

研究背景

1、食管鳞状细胞癌（ESCC）是中国最常见的癌症之一，死亡率极高。尽管诊断和治疗手段不断改进，但晚期ESCC患者的5年生存率仍低于25%。

2、现有的手术、化疗和放疗方法常伴有严重的副作用，且晚期ESCC患者面临药物和放疗耐药、转移和复发等问题，导致预后不良。

3、绿原酸是一种广泛存在于人类饮食中的酚类化合物，具有抗氧化和抗炎等多种生物活性，并已被证明在多种癌症中具有抗肿瘤作用。然而，绿原酸对ESCC的疗效及其分子机制尚不明确。

研究方法

1、细胞培养：使用KYSE30、KYSE70、KYSE140、KYSE150、KYSE180和KYSE510六种ESCC细胞系，分别在37°C和5% CO2条件下培养。

2、细胞增殖检测：通过CCK-8试剂盒检测不同浓度绿原酸（0-200 μM）对ESCC细胞增殖的影响。

3、克隆形成实验：在35mm培养皿中接种500个细胞，培养10天后观察绿原酸对克隆形成的影响。

4、迁移和侵袭实验：使用24孔Boyden小室进行迁移和侵袭实验，细胞在上室培养12小时（迁移）或24小时（侵袭），下室为含绿原酸的完全培养基。

5、寡核苷酸转染：使用siRNA转染技术敲低BMI1和SOX2的表达，并检测绿原酸对细胞增殖和迁移的影响。

6、流式细胞术：检测绿原酸处理后细胞的周期和凋亡情况。

7、西方印迹：检测绿原酸处理后细胞和组织中相关蛋白的表达水平。

8、动物模型：建立异位移植和原位移植动物模型，评估绿原酸对ESCC生长的抑制作用。

实验设计

1、细胞增殖实验显示，绿原酸在200 μM浓度下显著抑制所有六种ESCC细胞系的增殖。

2、克隆形成实验表明，绿原酸以剂量依赖性方式抑制克隆形成，100 μM浓度的绿原酸即可完全抑制克隆形成。

3、迁移和侵袭实验结果显示，绿原酸显著抑制KYSE30、KYSE140和KYSE180细胞的迁移和侵袭。

4、动物实验中，异位移植模型显示绿原酸显著减少肿瘤体积（减少30.0%-49.1%），原位移植模型显示绿原酸抑制肿瘤生长。

5、绿原酸处理后，ESCC细胞的BMI1和SOX2表达显著下调，而OCT4和Nanog表达无显著变化。

结果与分析

1、绿原酸处理后，ESCC细胞的Survivin表达显著下降，表明绿原酸通过诱导凋亡而非细胞周期阻滞来抑制ESCC。

2、在4-NQO诱导的食管癌模型中，绿原酸处理组的食管壁厚度显著低于对照组，生存时间延长17.04%（从60天延长至70.22天）。

3、敲低BMI1或SOX2后，绿原酸对细胞增殖和迁移的抑制作用显著减弱。

总体结论

1、绿原酸通过下调BMI1和SOX2的表达，抑制ESCC的生长、迁移和侵袭，并延长小鼠的生存时间。

2、这些发现为绿原酸作为ESCC治疗药物的临床应用提供了新的依据，并揭示了绿原酸通过调节干细胞相关基因表达来抑制ESCC的潜在分子机制。

文献链接